Q 提取的外泌体RNA中有DNA污染?查看详情
A外泌体裂解分相时,RNA在上层水相中,而DNA在中间层,转移上层水相时,要注意不要吸到中间层,所以要保留部分水相,不要全吸取。
Q 提取的外泌体RNA下游应用时,如RT-PCR不是很好?查看详情
A洗脱的外泌体RNA中含有乙醇和/或较多盐离子污染,会抑制PCR反应,所以,在最后洗涤时,将吸附柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的洗涤液。
Q 如何定量提取的外泌体RNA?查看详情
A外泌体RNA含量较少(1-100 pg/μL ),所以,用常规定量RNA方法是很难的,并且不同样本外泌体含量不同,含有的RNA量也不同,一般定量RNA方法有:
Bioanalyzer RNA Quantification kits;NanoDrop 2000;Quant-iT™ RiboGreen® RNA Assay Kit;qPCR Standard Curve。
Q 为什么提取的外泌体RNA A260/280低于2.0?查看详情
A大部分外泌体RNA是小RNA,且浓度很低,RNA的A260/280比值会随RNA浓度降低而降低,正常A260/280比值在1.0-1.6之间,低的A260/280比值不会影响下游应用。
Q 如果样本的粘度过大该如何处理?查看详情
A如果样本粘度过大时,可以用1×PBS缓冲液进行等体积稀释,将其混匀后再使用相应的外泌体提取试剂进行外泌体提取。
Q 细胞培养上清中加入外泌体沉淀试剂并离心后,没有出现沉淀,是哪里出的问题?查看详情
A由于某些细胞中外泌体含量比较低,所以加了外泌体沉淀试剂之后肉眼可能无法观察到沉淀,在重悬时使用 PBS 液朝离心管离心外侧的内壁反复吹打即可(避免剧烈吹打)。提取后的外泌体先进行BCA 蛋白定量检测,再决定是否进行后继实验。